Titre :	Etude des hydrolases chez les levures. Purification et caractérisation de l’α-amylase chez Clavispora lusitaniae ABS7
Type de document :	texte imprimé
Auteurs :	Nour El Houda Aichour, Auteur ; S Dakhmouche, Directeur de thèse
Editeur :	CONSTANTINE [ALGERIE] : Université Frères Mentouri Constantine
Année de publication :	2017
Importance :	70 f.
Format :	30 cm.
Note générale :	Une copie electronique PDF disponible en BUC
Langues :	Français (fre)
Catégories :	Biologie:Biochimie et Biologie Cellulaire et Moléculaire
Tags :	α-amylase  Clavispora lusitaniae  levure  thermostabilité  purification  Biochimie/Analyse Protéomique et Santé.
Index. décimale :	730 Biochimie et biologie cellulaire
Résumé :	Ce travail vise à étudier les hydrolases chez les levures et produire une α-amylase thermostable par des levures contaminant le blé cultivé et récolté dans une zone aride (Biskra, Sahara, Sud Algérie).La mise en évidence de la production des 05 enzymes :α-amylase, pectinase, maltase, cellulase et protéase est effectué sur milieu solide (Boite de Pétri) par deux souches levuriennes (L6 : Meyerozyma guilliermondi et L7 : Clavispora lusitaniae ABS7). Aprés 48 h d’incubation à différentes températures 40°C, 50°C, 60°C les deux souches ont montré une bonne croissance et ont produit 03 enzymes amylolytiques à savoir (l’α-amylase, la pectinase, la maltase) et la cellulase.La souche de levure L7 : Clavispora lusitaniae ABS7 semble être la plus performante dans la production de α-amylase thermostable, donc elle est sélectionnée pour la suite de l’étude. L’étude de la production enzymatique α-amylase, pectinolytique et cellulasique par la souche Clavispora lusitaniae ABS7 est effectuée par une fermentation en batch en erlenmeyers de 500 ml contenants 500 ml de milieu de production à base de lactosérum traité, supplémenté de 0 ,22g d’extrait de levure, 5,3 ml de solution de sels et 2,6 ml de la solution d’oligo-éléments et de substrat inducteur pour chaque enzyme séparément. la souche Clavispora lusitaniae ABS7 produit respectivement, des activités de l’ordre de 29530 U pour la pectinase et de 28518,52U pour l’α-amylase et de 16324,8 U pour la cellulase. Nous avons choisi de continuer notre travail avec l’α-amylase, comparer ses caractéristiques, après purification, avec ceux d’une α-amylase commerciale d’Aspergillus oryzae. La purification de l’alpha-amylase consiste à l’utilisation de l’acétone qui a permis l’augmentation de l’activité spécifique de l’α-amylase de 320,073 à 806,32 U/mg de protéines avec une récupération de 97,4 % , et le profil chromatographique de l’α-amylase sur Séphacryl-S200 montre l’existence de trois fractions protéiques contenant des activités α-amylasiques dont le premier pic renferme la fraction protéique et l’activité enzymatique les plus élevées. L’étude de l’effet du pH sur l’activité de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae et l’α-amylase commerciale montre des valeurs maximales de 12185,18U à pH 8 pour l’α-amylase de Clavispora lusitaniae et 5899,7 à pH 7 pour l’ α-amylase commerciale. D’autre part, l’étude de l’effet de la température sur les activités α-amylasiques indique que l’activité enzymatique de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae atteint son maximum à 70°C (24907,4 UI) ,tandis que la température maximale pour l’α-amylase commerciale est de 50°C (15074,07 UI) . Les résultats de l’étude de la thermostabilité enzymatique montrent qu’à 70°C l’α-amylase de Clavispora lusitaniae conserve 99,97% de son activité initiale pour un traitement thermique de 60 min, et pour une durée de 180 min d’incubation, l’enzyme maintien 99,80% de son activité. A 100°C et après 120 min d’incubation l’enzyme garde 99 ,74% de son activité, et pour une durée de 180 min, l’enzyme conserve 99,68% de son activité. L’α-amylase commerciale conserve après 30min de traitement thermique 96,57 % et 94,53% de son activité initiale à 50°C et 100C° respectivement, ainsi qu’après 180 min ,elle maintien 96,22 et 94,20 % de son activité initiale à 50°C et 100C° respectivement.. Les sels et les substances chimiques ont des effets variables sur l’activité des deux enzymes. Le Ca2+ n’affecte pasl’α-amylase de Clavispora lusitaniae,cependant il est un inhibiteur pour l’α-amylase commerciale (44,44%). En revanche, l’EDTA inhibe l’activité de l’enzyme de L7 et celle de l’enzyme commerciale, avec une perte respective de 19,21% et 33,33% de leur activité résiduelle. De cette étude,il ressort que l’activité de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae ABS7 (24907,4 UI) est meilleure que celle de l’enzyme commerciale (15074,07 UI) et il semble que l’α-amylase alcaline de L7 est aussi thermostable que l’enzyme commerciale :l’activité maximale à 70°C et une thermorésistance à 100°C (maintien 99,68% de l’activité) pendant un traitement thermique de 3 heures, Tous ces résultats permettent donc de qualifier l’α- amylase produite par Clavispora lusitaniae ABS7 comme une enzyme thermostable pouvant éventuellement être utilisée en industries.
Diplome :	Master 2
Permalink :	https://bu.umc.edu.dz/master/index.php?lvl=notice_display&id=4473

Etude des hydrolases chez les levures. Purification et caractérisation de l’α-amylase chez Clavispora lusitaniae ABS7 [texte imprimé] / Nour El Houda Aichour, Auteur ; S Dakhmouche, Directeur de thèse . - CONSTANTINE [ALGERIE] : Université Frères Mentouri Constantine, 2017 . - 70 f. ; 30 cm.
Une copie electronique PDF disponible en BUC
Langues : Français (fre)

Catégories :	Biologie:Biochimie et Biologie Cellulaire et Moléculaire
Tags :	α-amylase  Clavispora lusitaniae  levure  thermostabilité  purification  Biochimie/Analyse Protéomique et Santé.
Index. décimale :	730 Biochimie et biologie cellulaire
Résumé :	Ce travail vise à étudier les hydrolases chez les levures et produire une α-amylase thermostable par des levures contaminant le blé cultivé et récolté dans une zone aride (Biskra, Sahara, Sud Algérie).La mise en évidence de la production des 05 enzymes :α-amylase, pectinase, maltase, cellulase et protéase est effectué sur milieu solide (Boite de Pétri) par deux souches levuriennes (L6 : Meyerozyma guilliermondi et L7 : Clavispora lusitaniae ABS7). Aprés 48 h d’incubation à différentes températures 40°C, 50°C, 60°C les deux souches ont montré une bonne croissance et ont produit 03 enzymes amylolytiques à savoir (l’α-amylase, la pectinase, la maltase) et la cellulase.La souche de levure L7 : Clavispora lusitaniae ABS7 semble être la plus performante dans la production de α-amylase thermostable, donc elle est sélectionnée pour la suite de l’étude. L’étude de la production enzymatique α-amylase, pectinolytique et cellulasique par la souche Clavispora lusitaniae ABS7 est effectuée par une fermentation en batch en erlenmeyers de 500 ml contenants 500 ml de milieu de production à base de lactosérum traité, supplémenté de 0 ,22g d’extrait de levure, 5,3 ml de solution de sels et 2,6 ml de la solution d’oligo-éléments et de substrat inducteur pour chaque enzyme séparément. la souche Clavispora lusitaniae ABS7 produit respectivement, des activités de l’ordre de 29530 U pour la pectinase et de 28518,52U pour l’α-amylase et de 16324,8 U pour la cellulase. Nous avons choisi de continuer notre travail avec l’α-amylase, comparer ses caractéristiques, après purification, avec ceux d’une α-amylase commerciale d’Aspergillus oryzae. La purification de l’alpha-amylase consiste à l’utilisation de l’acétone qui a permis l’augmentation de l’activité spécifique de l’α-amylase de 320,073 à 806,32 U/mg de protéines avec une récupération de 97,4 % , et le profil chromatographique de l’α-amylase sur Séphacryl-S200 montre l’existence de trois fractions protéiques contenant des activités α-amylasiques dont le premier pic renferme la fraction protéique et l’activité enzymatique les plus élevées. L’étude de l’effet du pH sur l’activité de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae et l’α-amylase commerciale montre des valeurs maximales de 12185,18U à pH 8 pour l’α-amylase de Clavispora lusitaniae et 5899,7 à pH 7 pour l’ α-amylase commerciale. D’autre part, l’étude de l’effet de la température sur les activités α-amylasiques indique que l’activité enzymatique de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae atteint son maximum à 70°C (24907,4 UI) ,tandis que la température maximale pour l’α-amylase commerciale est de 50°C (15074,07 UI) . Les résultats de l’étude de la thermostabilité enzymatique montrent qu’à 70°C l’α-amylase de Clavispora lusitaniae conserve 99,97% de son activité initiale pour un traitement thermique de 60 min, et pour une durée de 180 min d’incubation, l’enzyme maintien 99,80% de son activité. A 100°C et après 120 min d’incubation l’enzyme garde 99 ,74% de son activité, et pour une durée de 180 min, l’enzyme conserve 99,68% de son activité. L’α-amylase commerciale conserve après 30min de traitement thermique 96,57 % et 94,53% de son activité initiale à 50°C et 100C° respectivement, ainsi qu’après 180 min ,elle maintien 96,22 et 94,20 % de son activité initiale à 50°C et 100C° respectivement.. Les sels et les substances chimiques ont des effets variables sur l’activité des deux enzymes. Le Ca2+ n’affecte pasl’α-amylase de Clavispora lusitaniae,cependant il est un inhibiteur pour l’α-amylase commerciale (44,44%). En revanche, l’EDTA inhibe l’activité de l’enzyme de L7 et celle de l’enzyme commerciale, avec une perte respective de 19,21% et 33,33% de leur activité résiduelle. De cette étude,il ressort que l’activité de l’α-amylase de Clavispora lusitaniae ABS7 (24907,4 UI) est meilleure que celle de l’enzyme commerciale (15074,07 UI) et il semble que l’α-amylase alcaline de L7 est aussi thermostable que l’enzyme commerciale :l’activité maximale à 70°C et une thermorésistance à 100°C (maintien 99,68% de l’activité) pendant un traitement thermique de 3 heures, Tous ces résultats permettent donc de qualifier l’α- amylase produite par Clavispora lusitaniae ABS7 comme une enzyme thermostable pouvant éventuellement être utilisée en industries.
Diplome :	Master 2
Permalink :	https://bu.umc.edu.dz/master/index.php?lvl=notice_display&id=4473